РФ-латекс-тест

Отбор и хранение образцов

Использовать свежую свободную от примесей сыворотку крови.

Хранить образцы не более 72 часов при 2-8°С. Длительное хранение допускается в замороженном виде при температуре не выше минус 20°С. Не подвергать образцы повторному замораживанию и оттаиванию.

Исследуемая сыворотка или плазма должна быть прозрачной и не содержать взвешенных частиц. При необходимости отцентрифугировать недостаточно прозрачные образцы перед анализом. Использование гемолизированных образцов не допускается.

Подготовка реагентов и материалов

Выдержать все компоненты диагностикума и исследуемые образцы не менее 15 мин при комнатной температуре.

Жидкие контрольные сыворотки и глицин-фосфатный буферный раствор готовы к применению.

Подготовить дополнительное оборудование:

- пластину стеклянную, или тестовый слайд;

- микропипетки автоматические или пипетки-мешалки пластиковые (на 50 мкл);

- палочки стеклянные или пипетки-мешалки пластиковые;

- планшет для серологических исследований;

- часы или таймер.

Примечание:

1) Все компоненты диагностикума содержат в качестве консерванта токсичное вещество - азид натрия; при использовании диагностикума необходимо соблюдать правила безопасной работы с токсичными материалами.

2) При работе с исследуемыми образцами сыворотки необходимо обращаться как с потенциально инфицированными материалами.

Качественное определение

Нанести на стеклянную пластину (в первую ячейку тестового слайда) 50 мкл К+, рядом, с интервалом 3 см (или в соседнюю ячейку слайда) - 50 мкл К-. На оставшееся место (в свободные ячейки) с аналогичным интервалом нанести по 50 мкл исследуемых образцов. Исследуемую сыворотку не разводить!

Легким встряхиванием флакона перемешать ДРФ-латекс и добавить по 50 мкл в каждую ячейку с образцом. Плоским концом пипетки-мешалки (стеклянной палочкой) тщательно перемешать каждую каплю, распределив реакционную смесь на площади диаметром около 2 см (по всей площади ячейки). Для каждой капли использовать новую пипетку-мешалку (стеклянную палочку).

Покачивать пластину (слайд) вручную или на механическом ротаторе в течение 2 минут, после чего сразу произвести учет результатов реакции.

Полуколичественное определение

В лунках планшета приготовить следующие разведения исследуемого образца в глицин-солевом буфере: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и 1:64.

Нанести по 50 мкл каждого разведения исследуемого образца, а также по 50 мкл К+ и К- на стеклянную пластину с интервалом 3 см (или в соответствующие ячейки слайда).

Легким встряхиванием флакона перемешать РФ-латексный реагент и добавить по 50 мкл в каждую ячейку с разведением исследуемого образца и с контрольными образцами, после чего перемешать каждую каплю, как указано выше для качественного определения.

Покачивать пластину (слайд) вручную или на механическом ротаторе в течение 2 минут, после чего произвести учет результатов реакции.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учет результатов проводить визуально на темном фоне при хорошем освещении.

Учет реакции позднее 2 мин после ее начала может дать искаженные результаты за счет неспецифической агглютинации частиц.

Положительной РАЛ считается наличие агглютинации латекса (появление зернистости или различимых частиц).

Отрицательной РАЛ считается отсутствие агглютинации (сохранение равномерно мутного фона).

Результаты реакции с исследуемыми образцами учитываются только при положительной реакции с К+ и отрицательной реакции с К-.

Качественное определение

Положительная реакция в качественном определении свидетельствует о наличии РФ в образце в концентрации не менее 8 МЕ/мл..

Отрицательная реакция в качественном определении свидетельствует, что концентрация РФ находится в норме.

Все образцы, давшие положительную реакцию, подлежат дополнительному исследованию для определения концентрации РФ.

Полуколичественное определение

Минимальная концентрация РФ, при которой наблюдается положительная реакция, составляет 8 МЕ/мл. Величина, обратная максимальному разведению, давшему положительную реакцию, является титром РФ.

Таким образом, концентрация РФ в исходном образце сыворотки (плазмы) крови рассчитывается по формуле:

Концентрация РФ(МЕ/мл) = 8(МЕ/мл) х Титр Пример: макс, разведение = 1:32; титр = 32; концентрация РФ(МЕ/мл) = 8x32 = 256.

Концентрация РФ при ревматоидном артрите коррелирует с активностью процесса, что делает этот показатель полезным для установления стадии и прогноза течения заболевания. Исследование образцов, отобранных повторно через определенные периоды времени, можно применять для наблюдения за результатами лечения.

В высоких концентрациях РФ характерен для ревматоидного артрита. Указанием на возможное наличие его активной формы служит уровень РФ в сыворотке или плазме крови от 120 МЕ/мл и выше. РФ может выявляться также (в основном в более низких титрах) при некоторых других заболеваниях, таких как системная красная волчанка, болезнь Шегрена, бактериальный эндокардит, ряде хронических инфекционных процессов и у отдельных здоровых людей. В то же время отрицательная реакция на РФ не может исключить наличие у пациента ревматоидного артрита.