Антитоксин диагностический дифтерийный очищенный ферментолизом и специфической сорбцией сухой

1. Подготовка препарата. Препарат должен полностью раствориться в течение 3-5 мин при внесении в ампулу 1 мл воды очищенной. В растворенном виде препарат представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость бесцветную или светло-желтого цвета. Растворенный препарат можно хранить в течение 10 суток при температуре от 2 °С до 8 °С.

2. Приготовление бумажных полосок. Полоски фильтровальной бумаги нарезают размером 1,5x8,0 см, заворачивают по 2-4 полоски в бумажный пакетик и стерилизуют в автоклаве при 120 °С в течение 30 мин. Сохраняют пакетики с бумажными полосками в стерильной чашке Петри до 3 недель. Смачивание бумажных полосок препаратом производят в стерильной чашке Петри. Для этого их переносят из пакетика обожженным пинцетом и каждую смачивают 0,25 мл антитоксина.

3. Подготовка чашек Петри. Для постановки реакции иммунопреципитации используют питательную среду для определения токсигенности дифтерийных микробов сухую (ОТДМ). В чашки Петри разливают по 12 мл питательной среды с добавлением по объему 30 % сыворотки крупного рогатого скота или 20 % нормальной лошадиной сыворотки. Открытые чашки с застывшим агаром подсушивают при температуре 37 °С в течение 15-20 мин, повернув вверх дном чашку и крышку. На середину чашки помещают полоску фильтровальной бумаги, предварительно смоченную препаратом антитоксина, и вновь подсушивают при температуре 37 °С в течение 15-20 мин.

4. Засев пробы. Исследуемую культуру засевают в виде бляшек диаметром 0,7-0,8 см с расстоянием 0,7-0,8 см между бляшками и на расстоянии 0,5 см от края полоски фильтровальной бумаги. При исследовании на токсигенность посев колонии или смеси из 2-6 колоний производят двумя бляшками по обе стороны фильтровальной бумаги. Контролем служит токсигенный штамм 24-48 часового роста. Контрольный токсигенный штамм засевают, чередуя его с испытуемыми культурами. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С. Штамм для контроля получают в ГИСК им. Л.А.Тарасевича.

Учет результатов реакции.

Результат учитывают через 24 часа и 48 часов. В питательной среде должна формироваться четкая линия преципитации напротив бляшек контрольной токсигенной культуры. Испытуемые культуры Corynebacterium diphtheriae, образующие преципитаты, считаются токсигенными, если эти линии преципитации сливаются с соответствующими линиями преципитации контрольного токсигенного штамма или идут на смыкание с ними.

Обезвреживание.

Использованные чашки Петри с дифтерийной культурой обезвреживают автоклавированием водяным насыщенным паром под давлением 1,5 кГс/см2 (0,15 Мпа) при температуре 120 °С в течение 1 часа.