МФСС WEBAPTEKA.RU

 

 

 

Министерство Здравоохранения

Российской Федерации

 

Департамент государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств и медицинской техники

 

Письмо

от 29.10.2001 N 291-22/144

 

Методы микробиологического контроля лекарственных средств

 

Департамент государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств и медицинской техники направляет к сведению и руководству изменение ? 2 к статье Государственной фармакопеи XI издания <Методы микробиологического контроля лекарственных средств> (ГФ XI, вып.2, с.187) и просит предусмотреть с 01 января 2002 года разделы <Микробиологическая чистота> и <Стерильность> в стандартах качества лекарственных средств, направляемых на регистрацию (перерегистрацию), в соответствии с указанным изменением.

 

Заместитель руководителя департамента                                     Д.В. Рейхарт

 

 

Изменение ? 2

к статье Государственной фармакопеи XI издания <Методы микробиологического контроля лекарственных средств> (ГФ XI, вып.2, с.187)

 

Раздел 1

 

Требования, предъявляемые к микробиологической чистоте лекарственных средств, субстанций и вспомогательных материалов

 

Таблица 1

 

Микробиологическая чистота лекарственных средств

 

Категория	Применение	Рекомендуемые нормы для ГФ XII издания
1	2	3
1	·         Для парентерального введения ·         Глазные лекарственные средства ·         Для нанесения на открытые раны и ожоги ·         Другие лекарственные средства, к которым предъявляется требование <стерильность>	Стерильность
2	·         Для применения местно, трансдерамально ·         Для применения интравагинально ·         Для введения в полости уха, носа ·         Для введения в дыхательные пути (за исключением тех лекарственных средств, которые должны быть стерильными)	·         Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) . не более 102 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл
3	Для приема внутрь или введения ректально А. Лекарственные средства из субстанций синтетического происхождения         Б. Лекарственные средства из субстанций природного происхождения (растительного, животного или минерального), за исключением лекарственных средств, включенных в категорию 4                   В. Детские лекарственные средства	·         Общее число аэробных бактерий - не более 103 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 102 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл   ·         Общее число аэробных бактерий - не более 104 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 102 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл ·         Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл ·         Энтеробактерий . не более 102 в 1 г или в 1 мл   ·         Общее число аэробных бактерий - не более 500 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 50 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл
4	Лекарственные средства, состоящие из одного вида сырья (фасованная продукция) или нескольких (сборы), а также растительное сырье <ангро> А. Лекарственные растительные средства или лекарственное сырье <ангро>, применяемые в виде настоев и отваров, приготовленные с использованием термической обработки   Б. Лекарственные растительные средства или растительное сырье <ангро>, применяемые без термической обработки	·         Общее число аэробных бактерий - не более 107 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 105 в 1 г или в 1 мл ·         Escherichia coli . не более 102 в 1 г или в 1 мл   ·         Общее число аэробных бактерий - не более 105 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 104 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл ·         Энтеробактерий . не более 103 в 1 г или в 1 мл

 

 

Таблица 2

 

Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных материалов для производства лекарственных средств

 

Категория	Применение	Рекомендуемые нормы для ГФ XIIиздания
1.2.	Субстанции для производства: ·         Стерильных лекарственных средств ·         Нестерильных лекарственных средств, относящихся к категории 2 ·         Нестерильных лекарственных средств, относящихся к категории 3 В	·         Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) . не более 102 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 г или в 1 мл   ·         Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл
2.2.	Субстанции синтетического происхождения для производства нестерильных лекарственных средств	·         Общее число аэробных бактерий - не более 103 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 102 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл
3.2.	Субстанции природного происхождения (растительного, животного или минерального)	·         Общее число аэробных бактерий - не более 104 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 102 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл ·         Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл ·         Энтеробактерий . не более 102 в 1 г или в 1 мл
4.2.	Вспомогательные материалы (мука пшеничная, крахмал, тальк и т.д.)	·         Общее число аэробных бактерий - не более 103 в 1 г или в 1 мл ·         Общее число грибов . не более 102 в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл ·         Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл ·         Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл ·         Энтеробактерий . не более 102 в 1 г или в 1 мл

 

Примечания к таблицам 1 и 2:

·         В фармакопейных статьях предприятия (ФСП) могут быть указаны в виде исключения и другие нормативы

·         При обнаружении других патогенных бактерий, кроме указанных выше, считают, что качество лекарственных средств, субстанций и вспомогательного материала не соответствует требованиям по показателю <Микробиологическая чистота>

 

Раздел 2

 

Испытание на Enterobacteriaceae

 

Дополнение к разделу: <Выявление и идентификация семейства Enterobacteriaceae> общей ФС <Испытание на микробиологическую чистоту> ГФ XI издания, выпуск 2, с. 197-198.

 

2.1. Количественное определение энтеробактерий, за исключением Escherichia coli и Salmonella

 

10 г или 10 мл испытуемого образца помещают в 100 мл среды N11, гомогенизируют и инкубируют при температуре 32,5 + 2,5⁰C в течение, как правило, двух часов, но не более пяти. В случае, если лекарственное средство . суппозитории или растворы в маслах, в среду N11 добавляют стерильный твин-80 в количестве не более 5% и стеклянные бусы для эмульгирования.

Гомогенат перемешивают и готовят разведения 1:10 и 1:100, используя для этого среду N3. В три пробирки с 10 мл среды N3 вносят 1 мл гомогената в первую, 1 мл разведения 1:10 во вторую и 1 мл разведения 1:100 в третью, то есть соответственно 0,1 г, 0,01 г, 0,001 г образца.

Посевы инкубируют при температуре 32,5 + 2,5⁰C в течение 24-48 часов. При наличии роста делают пересев петлей на плотную среду N4 (агар Эндо) и инкубируют чашки Петри при той же температуре в течение 18-24 часов. В случае появления характерных для Enterobacteriaceae колоний граммотрицательных палочек определяют количество энтеробактерий в 1 г или 1 мл образца по Таблице 3.

 

Таблица 3

Количественное определение энтеробактерий

 

Количество испытуемого образца			Вероятное количество бактерий в 1 г (мл)
0,1 г (мл)	0,01 г (мл)	0,001 г (мл)
1 мл гомогената	1 мл гомогената в разведении 1:10	1 мл гомогената в разведении 1:100
+	+	+	Более 1000
+	+	-	От 100 до 1000
+	-	-	От 10 до 100
-	-	-	Менее 10

 

Обозначения:

(+) - наличие роста бактерий

(-) - отсутствие роста бактерий

 

Количество клеток E. Coli в 1 г (мл) исследуемого лекарственного средства определяют, пользуясь также данной таблицей.

 

2.2. Испытание на наличие Escherichia coli и Salmonella

 

10 г (мл) образца лекарственного средства вносят в 100 мл питательной среды N11 (лактозный бульон). В случае, если лекарственное средство . жидкость, количество среды уменьшают до 90 мл. Инкубируют при температуре 32,5 + 2,5⁰С в течение 2-5 часов. 10 мл среды N11 переносят в 100 мл среды N3, перемешивают и инкубируют при температуре 32,5 + 2,5⁰С в течение 18-24 часов. При отсутствии роста на среде N3 (среда прозрачная, цвет не изменился) считают, что в лекарственном средстве не содержатся бактерии сем. Enterobacteriaceae. При наличии роста испытания продолжают.

 

2.2.1. Испытание на E.coli.

Со среды N3 делают пересев петлей на среду N4 (агар Эндо) и инкубируют при температуре 32,5 + 2,5⁰С в течение 18-24 часов. На среде N4 Е.coli образуют, как правило, характерные малиновые колонии с металлическим блеском или без него, диаметром 2-4 мм. Подозрительные на принадлежность к Е.coli колонии микроскопируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек отсеивают на скошенную в пробирках среду N1 и  инкубируют при температуре 32,5 + 2,5⁰С в течение 18-24 часов. Из пробирок с чистой культурой делают пересевы на среды N14 (агар Симмонса) и N15 (бульон Хоттингера), а также используют для теста на цитохромоксидазу. Через 18-24 ч. инкубации при температуре 32,5 + 2,5⁰С отмечаю бактериальный рост или его отсутствие на средах N14 и N15. Утилизацию цитрата устанавливают по изменению цвета среды N14 из зеленого в синий. Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности среды N15 при добавлении реактива Ковача или Эрлиха.

Если в образце обнаружены грамотрицательные  неспорообразующие палочки, не   обладающие ферментом цитохромоксидаза, не утилизирующие цитрат  натрия  и  образующие  индол,  считают,  что лекарственное средство контаминировано Escherichia coli.

 

2.2.2. Испытание на виды Salmonella

 

1 мл обогащенной культуры на среде N 3 вносят в пробирку с  10 мл  среды N 12 (селенитовая среда) и инкубируют при (32,5 +/- 2,5) град.  С в течение 16-18 ч.  Делают пересев петлей на  среду  N  5 (висмут  -  сульфит  агар)  и инкубируют при температуре (32,5 +/- 2.5) град.  С в течение 24-48  часов.  На  среде  N  5  Salmonella образует,  как  правило,  типичные  черные  колонии  с характерным   металлическим  блеском,  при  этом  участок  среды  под   колонией прокрашивается  в черный цвет.  Подозрительные на принадлежность к Salmonella колонии  микроскопируют  и  при  обнаружении  в  мазках грамотрицательных  палочек  отсевают  на  среду N 13 (трехсахарный агар с солями железа),  нанося большое количество культуры  петлей сначала  на  скошенную  часть  агара,  а  потом  уколом в столбик.

Параллельно ставят  тест  на  цитохромоксидазу,  используя  чистую культуру  со  среды N 1.  Через 18-24 часа инкубации при (32,5 +/- 2.5) град.  С отмечают изменение цвета среды из красного в  желтый только в столбике питательной   среды. Почернение среды свидетельствует об образовании сероводорода  -  типичном  признаке видов Salmonella.

Если в образце обнаружены грамотрицательные  неспорообразующие палочки, не     обладающие ферментом цитохромоксидаза, не ферментирующие сахарозу  и  лактозу  и  выделяющие  сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано Salmonella.

 

2.3. Питательные среды <*> и реактивы

 

1. Среда N 11 (лактозный бульон)  -  для  предварителного обогащения энтеробактерий

       Состав:

       Пептон ферментативный сухой            - 8 г

       Лактоза                                - 5 г

       Вода дистиллированная                  - 1000 мл

       ______________________________________________________________

       рН после стерилизации    6,9 +/- 0,1

 

2. Среда N 12 (селенитовая среда сухая)- для накопления и выделения сальмонелл.

 

Готовят согласно прописи на этикетке.

 

3. Среда N 13 (трехсахарный агар с солями железа). для выявления сероводорода

       Состав:

       Мясной экстракт                        - 3 г

       Дрожжевой экстракт                     - 3 г

       Пептон                                 - 20 г

       Лактоза                                - 10 г

       Сахароза                               - 10 г

       Глюкоза                                - 1 г

       Железа сульфат                         - 0,2 г

       Натрия хлорид                          - 5 г

       Натрия тиосульфат                      - 0,3 г

       Феноловый красный                      - 0,024 г

       Агар                                   - 15 г

       Вода дистиллированная                  - 1000 мл

       ______________________________________________________________

Рн после стерилизации 7.3 +/- 0.2. Разливают в пробирки по 5-7 мл.  Стерилизуют при 121 град. С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2-2,5 см.

 

4. Среда N 14 (цитратный агар Симмонса)

       Состав:

       Натрия хлорид                          - 5 г

       Магния сульфат                         - 0,2 г

       Аммония дигидрофосфат                  - 1 г

       Калия гидрофосфат                      - 1 г

       Натрия цитрат                          - 3 г

       Бромтимоловый синий                    - 0,08 г

       Агар                                   - 20 г

       Вода дистиллированная                  - 1000 мл

       ______________________________________________________________

       рН после стерилизации   7,2 +/- 0.1

 

Приготовление: агар расплавляют при нагревании в свежеприготовленной   дистиллированной воде.  Все соли сначала растворяют в небольшом объеме  воды,  затем  раствор  добавляют  к расплавленному агару и доводят водой до 1000 мл. Устанавливают рН, добавляют индикатор в виде 0,2%  водного раствора в объеме 40  мл, хорошо перемешивают и разливают в пробирки по 5-7 мл.  Стерилизуют при 121 град. С 15 мин. При охлаждении скашивают, оставляя столбик 2-2,5 см.

 

5. Среда N 15 (бульон Хоттингера) - для определения индола.

 

Примечание: <*>  - для испытания на микробиологическую чистоту можно   использовать аналогичные сухие питательные среды отечественных и зарубежных производителей после их валидации.

 

Тест на индол

 

В пробирку  со  средой  N  15,  в  которой выросла исследуемая культура,  вносят 0,5 мл  реактива  Ковача  или  Эрлиха  и  слегка встряхивают.  При  наличии  индола  наблюдают  появление  красного кольца на поверхности среды в пробирке.

 

       Реактив Ковача:

       Спирт амиловый или изоамиловый     - 75 мл

       Пара - диметиламинобензальдегид    - 5 г

       Кислота хлористоводородная, конц.  - 20 мл

 

Навеску альдегида растворяют в спирте при легком нагревании (в водяной бане при 50-55 град. С), остужают и медленно добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном  от  света  месте.  Реактив должен быть желтого цвета.

 

       Реактив Эрлиха:

       Спирт этиловый 96%                 - 95 мл

       Пара - диметиламинобензальдегид    - 1 г

       Кислота хлористоводородная, конц.  - 20 мл

 

Навеску альдегида растворяют в  спирте  и  медленно  добавляют кислоту. Раствор хранят в защищенном от света месте.

 

Раздел 3

 

Определение антимикробного действия нестерильных лекарственных средств

 

Лекарственные средства,  обладающие  антимикробным  действием, могут  подавлять  рост  отдельных  видов  бактерий и грибов.  Если исследуемое лекарственное средство оказывает ингибирующее действие на  микроорганизмы,  которые выявляют в нестерильных лекарственных средствах,  необходимо адекватно инактивировать его  во  избежание неправильной оценки результатов испытания на микробиологическую чистоту.   Определение   антимикробного действия нестерильных лекарственных средств проводят с   использованием   тест - микроорганизмов, полученных из Государственных коллекций.

 

3.1. Подготовка тест - штаммов для определения антимикробного действия нестерильных лекарственных средств

 

       1. Тест - микроорганизмы

                                            1            2

       Bacillus cereus                  ATCC  10702 (NCTC  8035)

       Escherichia coli                 ATCC 25922

                                            4

       Pseudomonas aeruginosa           ГИСК  453

                                                       3

       Staphylococcus aureus            ATCC 6538-P(FDA  209-P)

       Candida albicans                 ATCC 885-653

                                           5

       Aspergillus niger                BKM  F-1119

       ______________________________________________________________

           1

       ATCC  - Американская коллекция типовых культур

           2

       NCTC  - Национальная коллекция типовых культур, Великобритания

          3

       FDA -  Управление  по  контролю  качества  пищевых продуктов и

   лекарственных средств, США

           4

       ГИСК - Всероссийский музей патогенных бактерий (ГИСК им.  Л.А.

   Тарасевича), Россия

          5

       BKM  - Всероссийская коллекция микроорганизмов РАН, Россия

 

Тест - штаммы В.  cereus,  E.  coli,  P. aeruginosa, S. Aureus получают из Государственной Коллекции  патогенных  микроорганизмов ГИСК им.  Л.А.Тарасевича. Штамм C.albicans получают из Российского Микологического Центра (г.  Санкт - Петербург), штамм A.niger . из ВКМ  -  Всероссийской  Коллекции микроорганизмов РАН (г.  Москва).

Культуры тест - микроорганизмов могут быть получены также из  ВКПМ - Всероссийской    Коллекции    промышленных   микроорганизмов. Используемые тест - штаммы должны быть типичными по культурально - морфологическим и биохимическим свойствам.

 

Тест -  штаммы бактерий хранят при температуре (5 +/- 1) град. С  в  лиофилизированном  состоянии  или  под   слоем   стерильного вазелинового масла на среде Романова следующего состава:

       Панкреатический гидролизат казеина     8.0 г

       Натрия хлорид                          5.0 г

       Агар                                  10.0 г

       Вода дистиллированная               1000.0 г

       ______________________________________________________________

       рН после стерилизации 7.1 +/- 0.1

 

Тест - культуру C.albicans хранят под слоем вазелинового масла на  среде N 2 (агар Сабуро),  в которой количество агара уменьшено до 1%.  Тест - культуру A.niger хранят на среде N 2 (агар  Сабуро) (Госфармакопея,  вып.  2,  с.  200), делая пересевы через каждые 3 месяца.  Лиофилизированную культуру тест - штамма  из  ампулы  или культуру  со  среды  хранения  переносят  в пробирки с питательным бульоном:  среда N 8 для  бактерий,  жидкая  среда  Сабуро  -  для   C.albicans.  Посевы  на среде N 8 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град.  С в  течении  18-24  ч,  посевы  на  жидкой  среде Сабуро -  при температуре (22.5 +/- 2.5) град.  С в течение 48 ч - для C.albicans.  Посевы  A.niger  на  среде  N  2  инкубируют  при температуре  (22.5  +/-  2.5)  град.  С  до  появления  черных или темнокоричневых экзогенных спор (конидий) в течении 5-7 сут.

Перед определением   антимикробного   действия    нестерильных лекарственных средств культуры тест - штаммов бактерий отсевают на среду N  8  (питательный  бульон)  и  инкубируют  при  температуре (32.5 +/- 2.5) град. С в течение 18-24 ч.

Культуры грибов выращивают заранее:  C.albicans  -  на  жидкой среде  Сабуро  за  48  ч,  а  A.niger - на среде N 2 за 5-7 сут до начала определения.

 

3.2. Питательные среды и растворы

(Государственная фармакопея XI издания, выпуск 2, с. 193, 201, 208-209)

 

       Среда N 8 -               для выращивания бактерий.

       Жидкая среда Сабуро -     для выращивания Candida albicans.

       Среда N 2 (агар Сабуро) - для выращивания Aspergillus niger.

       Среды NN 3-5 -            для идентификации бактерий

                                 семейства Enterobacteriaceae.

       Среда N 9 -               для идентификации Pseudomonas

                                 aeruginosa.

       Среда N 10 -              для идентификации Staphylococcus

                                 aureus.

Фосфатный буферный  раствор  с натрия хлоридом и пептоном,  рН 7.0

 

3.3. Проведение испытания

 

Готовят разведения лекарственного средства 1:10,  1:20,  1:50, 1:100,  1:200,  1:500,  используя  фосфатный буферный раствор (для приготовления эмульсий в раствор добавляют не более 5% Твина-80).

Бульонные культуры  бактерий  и  C.albicans разводят фосфатным буферным раствором не менее,  чем 1:1000. Культуру A.niger смывают со скошенного агара фосфатным буферным раствором с 0.05% Твина-80. Определяют количество конидий  в  1  мл  смыва,  используя  камеру Горяева  или  чашечный  агаровый метод, и разводят до концентрации

     3     4

   10 -  10  КОЕ/мл.

Испытание проводят представленными в 3.3.1. и  3.3.2. методами определения антимикробного действия.

 

3.3.1. Модификация метода госфармакопеи XI

Каждое разведение лекарственного средства вносят по 1 мл в чашки Петри диаметром 90 мм, в одни из которых добавляют по 0.2 мл взвеси культуры B.cereus,  a в оставшиеся -  по  0.2  мл  культуры C.albicans  и  A.niger.  В  чашки  с  B.cereus  вносят  по 7-10 мл расплавленной среды N 1 при температуре (47.5 +/- 2.5) град.  С, в чашки с  культурами  C.albicans и A.niger - то же количество среды N 2.

Каждое разведение лекарственного средства вносят  по  1  мл  в пробирки  с  10 мл жидкой среды - N 3 и N 8.  В пробирки со средой N 3 добавляют по 1 мл взвеси культуры E.coli, в пробирки со средой N  8  -  по  1  мл взвеси культур P.aeruginosa и S.aureus,  каждую отдельно.  В  контрольные  чашки  и  пробирки  вместо   разведений лекарственного  средства  вносят  такое  же  количество  буферного раствора.

Посевы на средах N 1,  3,  8 инкубируют при температуре  (32.5 +/- 2.5) град.  С в течение 2 сут (среды N 3, 8) и 5 сут (среда N 1).  Посевы на среде N 2 инкубируют при температуре (22.5  +/-2.5) град.   C   в   течение   5  сут.  В  случае,  если  при  внесении лекарственного средства в жидкие питательные  среды  (N  3,  N  8) образуется  помутнение,  препятствующее учету результатов,  делают   пересев со среды N 3 на среду N 4 (агар Эндо), а со среды N 8 . на среды  N 9 и N 10.  При росте типичных колоний E.coli (среда N 4), P.aeruginosa (среда N 9) и S.aureus (среда N 10) отмечают  наличие роста тест - микроорганизма.

 

3.3.2. Метод репликаций (для водонерастворимых лекарственных средств).  В  стерильные  чашки  Петри  вносят  по  1  мл  каждого разведения  исследуемого  лекарственного  средства.  В контрольные чашки  вносят  по  1  мл  растворителя,  который  используют   для получения разведения.  В чашки Петри (как в эксперименте,  так и в контроле) добавляют по 15-20 мл  расплавленной  и  охлажденной  до (47.5 +/- 2,5) град.  С среды N 1,  в другие - такое же количество среды N 2 и быстро  перемешивают.  После  застывания  агара  чашки   подсушивают для удаления конденсата с поверхности среды.

На поверхность агара бактериологической петлей или репликатором наносят  бляшками  инокулят  каждого  тест  -  штамма бактерий и грибов на среды N 1 и N 2 соответственно.

Чашки со  средой N 1 инкубируют при температуре (32.5 +/- 2.5) град.  С в течение 48 ч.  Чашки  со  средой  N  2  инкубируют  при температуре (22.5 +/- 2.5) град. С в течение - 3-5 сут.

Учет результатов.  После  окончания  сроков  инкубации посевов (появление типичного роста тест -  микроорганизмов  в  контрольных чашках   без   лекарственного   средства)   отмечают  наличие  или отсутствие роста тест - штаммов бактерий и  грибов  на  средах,  в которые вносили различные разведения лекарственного средства.

Наличие такого же роста тест - микроорганизма, как в контроле, обозначают знаком "+",  отсутствие роста - знаком "-", слабый или замедленный рост - знаком "+/-".

Отсутствие роста  тест  - микроорганизма на среде с препаратом свидетельствует  о том, что исследуемый препарат в данном разведении обладает антимикробным   действием в отношении определенного тест - микроорганизма.

3.3.3. Нейтрализация антимикробного действия

Для устранения антимикробного действия лекарственного средства используют   различные   методы:   -   1)  увеличивают  разведение лекарственного  средства,  2)  добавляют  необходимое   количество соответствующего   специфического   инактиватора,  нейтрализующего антимикробное действие лекарственного средства,  но не угнетающего рост микроорганизмов - контаминантов (например, бета - лактамазу - для пенициллинов и цефалоспоринов, пара - аминобензойную кислоту -   для  сульфаниламидов),  3)  применяют  неспецифический инактиватор следующего состава, используемого в качестве растворителя:

 

       Твин-80                               - 30 г

       Лецитин яичный                        - 3 г

       L-гистидина гидрохлорид               - 1 г

       Пептон (мясной или казеиновый)        - 1 г

       Натрия хлорид                         - 4.3 г

       Калия фосфат однозамещенный           - 3.6 г

       Натрия фосфат двузамещенный           - 7.2 г

       Воды дистиллированной                 - 1000.0 мл

 

Стерилизуют в   паровом  стерилизаторе  насыщенным  паром  под давлением при температуре 121 град.  С  в  течение  15  мин.  Если антимикробное   действие  полностью  не  устраняется,  увеличивают концентрацию Твина-80 или лецитина.

 

                                               Директор ИГКЛС НЦЭГКЛС

                                                     Минздрава России

                                              профессор, академик МАИ

                                                        Н.С.ЕВТУШЕНКО

                                                    10 апреля 2001 г.

 

                                        Председатель Государственного

                                             Фармакопейного комитета,

                                           профессор, чл.- корр. РАМН

                                                       А.П.АРЗАМАСЦЕВ

                                                       4 июля 2001 г.

 

                                             Главный Ученый секретарь

                                      Государственного Фармакопейного

                                          комитета, доктор фарм. наук

                                                         В.Л.БАГИРОВА

                                                       4 июля 2001 г.